“ 層析柱進氣泡怎么辦？ ”

　　答疑解惑層析柱進氣泡有多種可能的原因，對于這些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解決氣泡困擾：

　　1.空氣進入層析柱（如：緩沖液走空，連接層析柱進入系統(tǒng)過程中等）

　　用純水反向沖洗層析柱（如有柱位閥可直接切換流向，沒有的話可將柱子反接

　　對于大多數層析柱來說可用乙醇沖洗，以提高排除氣泡的效率

　　2.緩沖液中有氣泡采取預防措施將緩沖液脫氣

　　在緩沖液入口使用空氣感應器

　　使用限流閥

　　3.溫度影響（在冷室操作后緊接著在室溫操作或低溫緩沖液直接在室溫使用）采取預防措施允許緩沖液在使用前達到熱平衡

　　“ 層析柱干了還可以再使用嗎？ ”

　　答疑解惑通常來說是不可以的，但也取決于您的純化需求。如果您的層析柱看起來像圖中這樣，不妨一試?？蓪⑷芤阂越咏盍蟴ui大耐受壓力的流速流經層析柱以排除空氣。結束之后，進行柱效測定，滿足您的要求便可繼續(xù)使用；如未成功排除氣泡，則層析柱需要重裝。

　　“ 膠平面與柱頭有間隙怎么辦？ ”

　　答疑解惑造成間隙的有多種可能的原因，對于這些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解決間隙困擾

　　1.由于不當裝填或者篩網孔徑與填料粒徑不匹配，導致填料漏出

　　更換篩網，重新裝填

　　2.層析柱堵塞，導致反壓增大

　　根據說明書清洗層析柱

　　更換濾膜采取預防措施澄清樣品

　　3.柱床裝填太差（裝柱過程中未有效壓縮填料）

　　調整柱頭高度，測柱效

　　4.填料被用于條件，如有機溶劑

　　檢查緩沖液選擇更加合適的使用條件

　　“ 怎樣避免由于樣品導致的壓力增大 ”

　　答疑解惑不同雜質會帶來不同的不良影響，對于這些不同的原因，要采取不同的措施，才能事半功倍，解決壓力增大困擾

　　1.顆粒性物質——堵塞濾膜和層析柱離心過濾有吸附的小體積樣品可用10000 g 離心15分鐘

　　細胞裂解液可50000g離心30分鐘過濾醋酸纖維素膜或PVDF膜具有zui少的非特異性蛋白吸附

　　選擇合適孔徑的濾器

　　2.沉淀——聚集體堵塞層析柱

　　過濾

　　通過改變pH，加鹽或添加劑穩(wěn)定樣品或減少聚體產生

　　避免機械壓力和過高的蛋白濃度

　　3.核酸——過高粘度可能會封閉填料上的配基

　　加入核酸酶

　　使用硫酸鏈霉素，聚乙烯亞胺或硫酸魚精蛋白沉淀

　　4.脂類——可能封閉填料上的配基或堵塞濾膜和層析柱

　　離心

　　使用硫酸銨，硫酸葡聚糖或PVP沉淀